肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma, HCC）是全球范围内最常见的肝癌类型，对人类健康构成巨大威胁。肿瘤微环境（Tumor MicroEnvironment, TME）在HCC的进展中扮演着重要角色。它由肿瘤细胞、免疫细胞、基质细胞和细胞外基质等组成，这些组分之间的相互作用影响肿瘤的生长、侵袭和对治疗的响应。B细胞在肿瘤微环境中的作用复杂且多样，它们可以发挥抗肿瘤作用，如通过呈递抗原、产生细胞因子和分泌抗体等，也可能促进肿瘤进展，如通过调节性B细胞（Bregs）分泌免疫抑制性细胞因子。因此，深入理解B细胞在HCC中的作用对于开发新的免疫治疗策略至关重要。在研究HCC的过程中，传统的2D细胞模型和动物模型无法充分模拟复杂的人类肝脏肿瘤微环境。NAC-Organ技术能够构建高仿生性的肿瘤免疫微环境模型，为研究肿瘤发展机制提供了强大的实验工具。

近日，复旦大学研究团队在期刊《Advanced Science》上发表了题为《Increased PRP19 in Hepatocyte Impedes B Cell Function to Promote Hepatocarcinogenesis》的研究论文。本研究中，研究人员对高和低B细胞浸润的HCC样本的表达差异进行了探索，以识别关键调节因子。研究发现，抑制肝细胞中的PRP19（Pre-mRNA处理因子19）的表达促进了肿瘤组织中B细胞浸润，从而阻碍HCC的生长。这一发现不仅增进了我们对肝癌免疫微环境的理解，也为肝癌的免疫治疗提供了新的策略。

研究发现，在B细胞低浸润的HCC样本中，PRP19的表达增加，并且与B细胞标志物CD20的表达水平呈负相关。这意味着PRP19的高水平表达可能与B细胞在肿瘤中的减少有关。通过在小鼠模型中敲除PRP19，研究者观察到肿瘤大小减小和生长速率减慢。此外，这些小鼠的肿瘤组织中B细胞的比例增加，表明PRP19的缺失可能通过促进B细胞浸润来抑制HCC的发展。

图1 PRP19在HCC发展过程中调节B细胞免疫功能的作用示意图

为进一步明确这一调控方式，研究者利用NAC-Organ 3D培养技术构建了野生型及PRP19敲除的的3D肝癌模型， 并通过与B细胞共培养，观察到PRP19表达水平的降低显著增强了B细胞的向肿瘤组织内部迁移的能力及其向浆细胞的分化（参见图2）。这一结果进一步证实，抑制肝细胞中PRP19的表达能够有效阻止肝细胞癌的发展。

图2 IF染色检测对照和PRP19敲除Hep1-6球体中B细胞的浸润水平

进一步通过RNA测序和后续实验，研究者揭示了PRP19通过与DEAD-box解旋酶5（DDX5）相互作用，导致DDX5蛋白的泛素化和降解，进而影响CXCL12 mRNA的稳定性，从而通过CXCL12/CXCR4轴抑制B细胞募集和浆细胞分化。作者的研究揭示了HCC细胞中PRP19的表达与肿瘤浸润B细胞功能之间的关系，并为HCC免疫治疗提供了新的临床益处。

利用NAC-Organ技术研究肿瘤免疫微环境：NAC-Organ技术构建的3D肿瘤模型能够保留肿瘤组织的免疫细胞组分、模拟免疫微环境，可以检测特定基因修饰、药物等对肿瘤组织内免疫细胞的调控。NAC-Organ技术无需基质胶能够与免疫细胞进行长期共培养，用于检测循环免疫细胞、免疫细胞药物对肿瘤组织的靶向和杀伤作用。

图3 利用NAC-Organ技术构建免疫微环境模型：HE染色结果表明原代肝癌组织及NAC-Organ模型中均有明显的免疫细胞浸润。通过对T细胞和巨噬细胞Marker进行免疫荧光染色，NAC-Organ肿瘤模型中的免疫细胞与原代组织中的免疫细胞保持一致。

图4 NAC-Organ 肿瘤模型与循环免疫细胞共培养：免疫细胞能够主动侵入肿瘤模型，示踪免疫细胞与肿瘤细胞的相互作用，肿瘤细胞（红色荧光标记），PBMC细胞（绿色荧光标记）。